分子生化

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服务介绍

ELISA实验技术服务     

      酶联免疫吸附试验(Enzyme-linked Immunosorbnent assay,ELISA)是利用蛋白和聚苯乙烯表面疏水吸附的特性,将抗原-抗体特异性结合反应固定于固相载体表面进行,同时结合酶对底物的高效率催化作用而产生高灵敏的检测效果。用于定量测定,可以有效检测出浓度为pg/L级的待测物。是一种灵敏高效的体外检测手段,广泛用于研究和体外诊断。

                                                                                        ELISA实验原理图

服务内容

      方法一:用于检测未知抗原的双抗体夹心法:

      1. 包被:用0.05 M pH9的碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1~10 μg/mL,在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1 mL,4°C过夜。次日,弃去孔内溶液,用洗涤缓冲液洗3次,每次3分钟;

      2. 加样:加一定稀释的待检样品0.1 mL于上述已包被之反应孔中,置于37℃孵育1小时,然后洗涤(同时做空白孔,阴性对照孔及阳性对照孔);

      3. 加酶标抗体:于各反应孔中,加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.1 mL,37°C孵育0.5~1小时,洗涤;

      4. 加底物液显色:于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1 mL,37℃ 10~30分钟;

      5. 终止反应:于各反应孔中加入2 M硫酸0.05 mL;

      6. 结果判定:可于白色背景上,直接用肉眼观察结果,反应孔内颜色越深,阳性程度越强,阴性反应为无色或极浅,依据所呈颜色的深浅,以“+”、“-”号表示;也可测OD值,在ELISA检测仪上,于450 nm(若以ABTS显色,则410 nm)处,以空白对照孔调零后测各孔OD值,若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍,即为阳性。

      方法二:用于检测未知抗体的间接法:

      用包被缓冲液将已知抗原稀释至1~10 μg/mL,每孔加0.1ml,4℃过夜。次日洗涤3次。加一定稀释的待检样品(未知抗体)0.1 mL于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时,洗涤。(同时做空白、阴性及阳性孔对照)于反应孔中,加入新鲜稀释的酶标第二抗体(抗抗体)0.1 mL,37°C孵育30~60分钟,洗涤,最后一遍用DDW洗涤。其余步骤同“双抗体夹心法”的4、5、6。

服务说明

      1. 本实验可以检测以下样本:

        1) 血清:在室温自然凝固后,离心20分钟(2000-3000 rpm),收集上清。

        2) 血浆:根据具体的实验目的选择EDTA,柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂,混合10-20分钟后离心20分钟(2000-3000 rpm),取上清进行实验。

        3) 尿液、脑脊液等:使用无菌收集管,离心20分钟(2000-3000 rpm)。仔细收集上清完成实验。

        4) 细胞培养上清:如果分泌成分在培养基中,可以直接检测上清。如果待测是细胞,应仔细收集细胞,通过反复冻融释放出细胞内成分,离心取上清进行检测。

        5) 组织标本:切取标本后称重,加入一定量的PBS或组织蛋白萃取试剂,并加入蛋白酶抑制剂,充分匀浆。离心20分钟左右( 2000-3000 rpm),收集上清置于-20℃或-80℃ 保存。如有必要,可将样品浓缩干燥,分装后一份待检测,其余冷冻备用。

      2. 样本保存及传递:

        1) 3天内测定的标本可放置在4°C,否则需低温冻存运输。

        2) 周期批量收集的样本即使分装后放在-20°C或-80°C中保存,避免反复冻融。注:2-8 °C可保存 72小时,-20 °C 可保存1个月。-80 °C可保存6个月。

      3. 实验周期:实验周期一般在收到样品后7-14个工作日;

      4. 若另有疑问欢迎向本公司咨询,我们将竭诚为您服务。

质量承诺

      1.权威的实验结果报告及结果分析(本公司承诺检测结果准确、客观、可信,但不保证得到某一特定结果。);

      2.真实的原始实验数据;

      3.详细的实验步骤。