分子生化

当前位置: 主页 > 技术服务 > 分子生化 >

服务介绍

RNAi技术服务    

       研究表明,将与mRNA同源的正义RNA和反义RNA组成的双链RNA(dsRNA)导入细胞,可以使mRNA发生特异性的降解,从而抑制其相应基因的表达。这种转录后基因沉默机制(Post-transcriptional gene silencing, PTGS)被称为RNA干扰(RNAi)。由于RNAi具有高度的序列专一性,可以特异地使特定基因沉默,获得功能丧失或降低突变,因此RNAi可以作为一种强有力的研究工具,用于功能基因组的研究。

      我们应用国外知名公司的RNAi Designer平台,可对靶基因序列进行干扰位置效应评价和序列同源型分析,完成siRNA/miRNA多种序列的的设计,并提供从siRNA合成、RNAi载体构建到RNAi功能验证等全面的RNAi解决方案。

服务内容

服务说明

      1、siRNA合成

      客户提供:

        1)目的基因的Accession Number(Human、Mouse或Rat种属)以及技术要求(包括OD和nmols的精确数量、纯化类型和修饰要求等)

        2)细胞株和详细的细胞培养的操作步骤

        3)一抗(如果需要Western blot检测)

      注: 普通siRNA:均有HPLC纯化,100%除去尚未配对的单链 ;化学修饰siRNA:利用修饰以提高siRNA在血清和培养基种的稳定性;荧光标记siRNA;siRNA对照:普通阴性对照、荧光标记的阴性对照(易观察,可观察转染效率)和siRNA阳性对照(作为一个实验系统检查,确保在您的实验方法是可靠的;

      2、质粒载体shRNA的构建

      客户提供:待研究mRNA序列信息。

      3、microRNA干扰载体构建

      客户提供:

        1) 目的基因的Accession Number(Human、Mouse或Rat种属)

        2)细胞株和详细的细胞培养的操作步骤

        3)一抗抗体(如果需要Western blot检测)

质量承诺

      1、siRNA合成:

        1)转染效率分析 ;

        2)Knockdown结果。

      针对靶基因设计的3条siRNA可保证其中2条的Knockdown效率达到75%(在转染效率大于80%的情况下)。

      2、质粒载体shRNA的构建:

        1)阳性克隆质粒;

        2)阳性克隆甘油菌;

        3)测序报告以及实验方法报告。

      3、microRNA干扰载体构建:

        1)构建好的表达载体和相应的甘油菌;赠送阴性对照甘油菌 ;

        2)测序报告 ;

        3)转染效率分析 ;

        4)Knockdown结果。

      针对某靶基因设计的3条miRNA序列,在转染效率 > 80%的前提下,我们保证至少有1个克隆可以达到70%转录水平的沉默效率服务流程 。