分子生化

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服务介绍

免疫荧光技术服务   

       免疫荧光技术服务(Immunofluorescence technique)又称免疫荧光抗体染色,是标记免疫技术中发展最早的一种。它是基于免疫学、生物化学和显微镜技术建立起来的一项技术。由于抗原-抗体反应具有高度的特异性,我们不仅能够看到待测样本中目的蛋白的位置,同时也能通过荧光的强度推测反应蛋白的含量。如果使用两种以上的抗体进行染色,我们可以观察到多种蛋白在组织中的分布,以及相互作用关系等。用于标记蛋白的荧光素主要有异硫氰酸荧光黄(FITC),四乙基罗丹明(RB200)和四甲基异硫氰酸罗丹明(TMRITC)。

      直接染色法:

      将标记的特异荧光抗体直接滴加在抗原标本上,经过一定时间的染色。洗去多余的荧光抗体,在荧光显微镜下便可以观察到由于抗原抗体结合而发出的荧光。此方法操作简单,实验流程短。缺点是:一种标记抗体只能检测一种抗原,敏感性略差,使用此方法应设置阳性和阴性对照。

      间接染色法:

      使用此方法检测的时候,先用未标记的一抗与抗原标本进行反应,反应一段时间后洗去多余抗体,再使用标记有荧光的二抗抗体与一抗反应。如果第一步中的抗原和抗体互相反应,则会形成抗原-一抗-二抗的复合物,再洗去未反应的标记抗体,在荧光显微镜下便能够看到荧光。

服务内容

      1.已转染72h的细胞种于共聚焦专用培养皿里,预冷PBS洗三遍,每次5分钟;

      2. 细胞半干时,覆盖以4%冷的多聚甲醛固定15分钟,避光;

      3.吸去多聚甲醛后,用预冷PBS洗三遍,每次5分钟;

      4. 0.5% Triton X-100覆盖细胞10分钟,预冷PBS洗三遍,每次5分钟;

      5. 与二抗相同宿主的血清室温封闭30分钟;

      6. 配制一抗:SAB + FBS = 1:200;

      7.加入一抗覆盖细胞,锡纸包裹4℃避光过夜;

      8.取出细胞复温至室温约1 h;

      9.冰1‰Tween洗两次,每次5分钟,于摇床。冰PBS洗一次,5分钟,于摇床;

      10.配制荧光标记二抗:用FBS配制,浓度1:200;  

      11.加入二抗,室温孵育1小时,避光;

      12. 冰1‰Tween洗两次,每次5分钟,于摇床。冰PBS洗一次,5分钟,于摇床;

      13.DAPI染核,每皿1滴,完全覆盖住细胞即可;

      14. 冰1‰Tween洗两次,每次5分钟,于摇床。冰PBS洗一次,5分钟,于摇床;

      15.加入防荧光淬灭封片剂封片,避光;

      16.上机confocol。

服务说明

      1. 签订实验协议;

      2. 客户提供:

        1) 客户可以提供已经制备但未做进一步处理的细胞爬片、石蜡切片、冰冻切片等;

        2) 客户可以提供组织样品,委托我们完成样品切片的制备;

        3)客户可以自行提供抗体,也可使用公司抗体库中抗体。

      3. 实验周期及服务费用因样品的数量而改变,具体详询本公司。

质量承诺

      1.返还未使用的客户提供的抗体;

      2.真实的实验原始数据;

      3.权威的检测报告;

      4.详细完整的实验流程。